单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抵抗能力外来物种活性聊天、寡核苷酸体现直接费用昂贵或操作的方法多样化。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯教援销售团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低生产成本、跨动物群、全服务平台兼容的全新解决方案。

期刊杂志介绍

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由全球地理海瑞朗隐性基因病与发育状况物理学学设计所和全球隐性基因病先学会主办人的国家学界性中文核心杂志论文学术期刊，着力推进于报到生活地理学和医学专业隐性基因病学域的原创内容性设计研究内容。JGG 202历经四年度的影响原子核7.1，Scopus学界性中文核心杂志论文学术期刊评定标准CiteScore 9.9，跻身JCR 202历经四年度GENETICS & HEREDITY域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY域Q1区，跻身全球地理海瑞朗中文核心杂志论文学术期刊系统分割物理学学个类别1区(Top中文核心杂志论文学术期刊)，隐性基因病学和生化模式与原子核物理学学小类双1区。

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什么样是HEATag

完美的“二三合一”方案

HEATag是由凝集素和HUH内切酶定义的协同蛋白质

「分析器」摸块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化突显（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「接连器」模块图片 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）指数长条型码完成共价接。

“1+1>2”的郊果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样板记号与可追溯。

Fig1: HEATag多方面箭头作用图示图

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实战经验检查

HEATag究竟有可以打？

行在有差异状态下，做到喂母乳甲壳动物生殖细胞系系单生殖细胞系混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。实验管理团队为 HEATag 设立了多轮 “压力值检测”，从神经细胞系系到神经细胞系核，从常溫到高低温，从新鲜范本到规定范本，全方面验正它的不稳性和可以信赖性。

第一点轮测试测试对哺乳期间各种动物组织生殖细胞系系：研究探讨工人选购了来自于人、鼠、仓鼠二个鱼类的哪几种组织生殖细胞系（HEK293T、K562、MEF、CHO），在恒温下使用 HEATag 标记图片后混合型喂养测序。不可能的回收利用的 11447 个组织生殖细胞系中，85.66% 都能可以通过 HEATag 长条码精准的相匹配到原鱼类，模板间是交叉污染破坏非常少，UMAP 聚类算法阐述更要随时证明材料，HEATag 长条码与鱼类特情人dna组特性宽度不同。 随后，测试软件具体能力进一次升阶：科学研究人战胜困难在 4℃下图标丰富人体神经元系、在室内温度下图标甲醇固定位置好人体神经元系，也间接图标人体神经元系核。成果即使出众：其他具体能力下，样版标贴与植物物种的信息均有很好的的涉及性，转换精确度率超 95%。然而甲醇固定位置好会促使较轻的转录本相互的污染，人体神经元系核化学合成就会大量 RNA 因为流失，人体神经元系类型的的批注成果即使与丰富样版维持一直，说明 HEATag 能图标有所差异办理具体能力下的实验所样版。

Fig2: HEATag 可在有差异水平下完成任务单内部转录组混样研究

能够标出喂奶动植物和大海无脊柱动植物的原代受损细胞

比如说体组织细胞系测验是 “依据题”，那组织开展样品即是 “追加题”， 这部分样品一般因体组织细胞性质复杂性、生态环境适宜性特异，将成为图标高技术的 “要点”，而 HEATag 刚好在这部分 “要点” 上增添了的优势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸企业，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不禁能被精准的识别，拥有首要细胞膜型号的聚类分析法数据都分明可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋动物动物的兼容性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长条码与鱼类转录组具备着较高相符性，不造成因高盐大环境从而导致的 “标签失灵”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可控制辅乳期哺乳动物组建模本几斤 scRNA-seq 定性分析

Fig4: HEATag可实现目标新鲜的海上无脊椎神经甲壳动物多沉 scRNA-seq 了解

HEATag与神经细胞的融入没造成转录组的为显著改善

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在完全标注日常任务的时，都不会对后期的的转录类物质析导致打扰，有保障了论述数据文件的真实可靠性。

Fig5: HEATag不想作用样表的 RNA 表达出来玩法

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明天可期

HEATag 能为单血细胞设计带来了啥子？

HEATag 的颜值，远不已于 “很好解决符号相关问题”，它的利索性和普遍意义，将要为单内部论述加载非常多有机会性

从技术应用景象来看看

HEATag 能履盖从 “较为简单较为科学研究方案分析”（如癌开发团队与合适开发团队、治疗药物治理与對照）到 “青岛浒苔较科学研究方案”（如开发团队神经元膜图谱生成、mtk量建立）的全领域所需。发生变化 PIP-seq、Stereo-cell 等创新型可初始化技术应用的成长 ，HEATag 还能进一大步优化单神经元膜科学研究方案的通量，助力器教学科研开发团队进行更青岛浒苔较的大型项目。

从跨教育领域竞争力而言

HEATag 不单选主要用于转录组学，还能与表观DNA组学、高蛋白质组学、地方组学等系统水平相结合，实现订做字段和寡核苷酸回文序列，HEATag 能够便捷融进了 各不相同的组学标准流程，不影响力4g信号猎取长度。而且，通过HEATag还能够发展方向单组织糖组学实验系统水平。

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协议动图

拜谱海洋生物与陈凯教援获得总体的合作相关

需要注重的是，在 HEATag 技艺展示出出巨大的操作空间的后台下，拜谱菌物已与南边海底科学有效与工程项目福建科学科学实验所（上海）陈凯教受实现目标总体企业合作相关。另一方策划贯穿 HEATag 技艺的产业的发展化半空、研究方案开发转化成等位置而铺展开的深层协调，统筹推进一种高质量益费、跨种类的单神经元标签技艺更好操作于预期研究方案开发场景设计，为许多科学科学实验所保证高质量、市场经济的单神经元研究方案交通工具，助力器研究方案开发上班者在神经元菌物学、海底菌物学、传染性疾病系统等业务领域完成许多超过